求购富浓缩生长因子纤维蛋白

求购富浓缩生长因子纤维蛋白
富自体浓缩生长因子（Concentrated Growth Factors，CGF）纤维蛋白凝胶（液体）是通过差速不间断离心技术获取的血液提取物，含有多种生长因子及纤维蛋白，具有促进细胞增殖、分化、趋化和刺激血管化的功能，能够加速软硬组织修复，是再生医疗领域中的新技术。富自体CGF纤维蛋白凝胶可应用于修复骨缺损、牙周组织缺损、软组织创伤和上颌窦底提升术等方面。
　　本实验采用酶联免疫吸附法检测三种不同处理离心管制取的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）中活性因子及其含量，探讨三种离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）中活性因子及含量的不同，为临床应用富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）提供理论依据。
　　方法:
　　1.研究对象入选标准选择五位健康志愿者（男3例，女2例）。入选标准:
　　1.1 年龄在18～23岁之间;
　　1.2 无肝炎史，无免疫疾病史;
　　1.3 采血前一个月无感染史，无服用抗菌药史;
　　1.4 采血前3个月未服用阿司匹林等影响血细胞的药物;
　　1.5 女性志愿者未在月经期;
　　1.6 志愿者知情并同意采血用于本实验。
　　2.实验步骤
　　2.1 实验分组根据不同处理的Medifuge离心制造机特殊匹配试管（9 ml，真空负压）制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）性状不同分为三组:
　　A组:管帽为红色标记的离心管，内壁粗糙，未添加抗凝剂等化学试剂，制备富自体CGF纤维蛋白凝胶;
　　B组:管帽为白色标记的离心管，内壁光滑，未添加抗凝剂等化学试剂，制备的富自体CGF纤维蛋白液室温静置20 min后变成松散的凝胶;
　　C组:管帽为绿色标记的离心管，添加肝素钠抗凝剂，制备富自体CGF纤维蛋白液。
　　2.2 CGF制备分别采用A、B、C三组离心管，采取每位志愿者前臂静脉血27ml，每只离心管9 ml，注满后勿摇动。立即放入Medifuge离心制造机，按预定程序制备CGF。各获得:
　　A组:富自体CGF纤维蛋白凝胶五份;
　　B组:富自体CGF纤维蛋白液五份;
　　C组:富自体CGF纤维蛋白液五份。
　　3.检测前样本制备
　　3.1 富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）的液态处理A组:将富自体CGF纤维蛋白凝胶（去除底端红色凝胶部分），移入玻璃匀浆器，冰浴条件下，缓慢研磨成匀浆，匀浆液在4℃条件下，以3000r/min的速度离心5 min，留取上清液待测;
　　B组:将富自体CGF纤维蛋白液室温静置20 min后变成的松散凝胶移入玻璃匀浆器，冰浴条件下，缓慢研磨成匀浆，匀浆液在4℃条件下，以3000 r/min的速度离心5 min，留取上清液待测;
　　C组:吸出富自体CGF纤维蛋白液直接移入5 ml离心管内待测。
　　3.2 样本稀释检测前对检测样本以0.01 mol/L的PBS缓冲液做如下稀释:
　　检测IGF-1及BMP-2时，将三组样本各稀释50倍;
　　检测VEGF-A及EGF时，将三组样本各稀释10倍;
　　检测PDGF-BB、bFGF、TNF-α、IL-Iβ及OPG时，不稀释样本。
　　3.3 样本活化检测TGF-β1含量时，三组样本需在检测前2小时内做活化处理。
　　4.活性因子成分及含量检测
　　4.1 双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)对三组样本中TGF-β1、PDGF-BB、 EGF、 VEGF-A、IGF-1、BMP2、OPG、TNF-α和IL-Iβ进行定性及定量检测。
　　4.2 竞争免疫抑制ELISA法对三组样本中bFGF进行定性及定量检测。()具体操作步骤严格按照使用说明书进行。
　　5.统计学分析
　　采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。首先对实验数据的不同组进行正态性和方差齐性检验。如果服从正态性和方差齐性，则采用单因素方差分析(One-Way Analysis of Variance，简称One-Way ANOVA)进行各组均数差异的比较。如果存在显著性差异则需进行两两比较，加用SNK-q检验进行多重比较，分析比较各组的差异所在。如果不服从正态性和方差齐性，则采用秩和检验。检验水准定为0.05，即P＜0.05，差异具有统计学意义。
　　结果:
　　1.富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）肉眼观察:
　　A组制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶为淡黄色的凝胶，柔软，韧性好;B组制备的富自体CGF纤维蛋白液为淡黄色澄清液体，室温静置约20min后变成松散的凝胶，柔软，韧性差;C组制备的富自体CGF纤维蛋白液为淡黄色澄清液体，室温静置不会发生变化;
　　2.活性因子检测结果:
　　三组富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）中活性因子检测结果相同，都含有:转移生长因子-β1（Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1）、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factors-1，IGF-1)、血管内皮生长因子-A(Vascular Endothelial Growth Factor-A，VEGF-A)、血小板衍生生长因子-BB(Platelet-derived Growth Factor-BB，PDGF-BB)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic Fibroblast Growth Factor， bFGF)、骨形成蛋白-2（Bone Morphogenetic Proteins-2，BMP-2）、表皮生长因子(EpidermalGrowth Factor，EGF)和骨保护素(Osteoprotegerin，，OPG)等活性因子;三组富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）均未检出肿瘤坏死因子-α(TumorNecrosis Factor-α，TNF-α)和白细胞介素-Iβ（Interleukin-1β，IL-Iβ）。
　　3.活性因子含量检测结果:
　　TGF-β1含量:A组:5749.96±2039.28 pg/ml，B组:994.22±107.84pg/ml，C组:1878.61±789.97 pg/ml;三组之间有显著性差异(P＜0.05);各组TGF-β1含量从高到低依次为:A组、C组、B组。
　　PDGF-BB含量:A组:1696.85±183.8 pg/ml，B组:1680.34±143.11pg/ml，C组:1268.49±279.45 pg/ml;三组之间有显著性差异（P＜0.05）;各组PDGF-BB含量从高到低依次为:A组、B组、C组。
　　VEGF-A含量:A组:1276.47±153.10 pg/ml，B组:1404.49±353.59pg/ml，C组:2015.3±586.16 pg/ml;三组之间有显著性差异(P＜0.05);各组VEGF-A含量从高到低依次为:C组、B组、A组。
　　IGF-1含量:A组:35.45±9.56 ng/ml，B组:44.8±12.81 ng/ml，C组:51.39±31.18 ng/ml;三组之间没有显著性差异(P＞0.05);各组IGF-1含量数值从高到低依次为:C组、B组、A组。
　　bFGF含量:A组:8.47±1.8 ng/ml，B组:8.39±1.0 ng/ml，C组:11.62±4.56 ng/ml;三组之间没有显著性差异(P＞0.05);各组bFGF含量数值从高到低依次为:C组、A组、B组。
　　BMP-2含量:A组:966.7±125.82 pg/ml，B组:1051.5±343.68 pg/ml，C组:1155±412.72 pg/ml;三组之间没有显著性差异(P＞0.05);各组BMP-2含量数值从高到低依次为:C组、B组、A组。
　　OPG含量:A组:2494.76±1822.45 pg/ml，B组:2749.95±1908.45 pg/ml，C组:2741.15±2183.73 pg/ml;三组之间没有显著性差异(P＞0.05);各组OPG含量数值从高到低依次为:B组、C组、A组。
　　EGF含量:A组:813.44±597.8 pg/ml，B组:322.31±31.47 pg/ml，C组:345.5±32.32 pg/ml;三组之间没有显著性差异(P＞0.05);各组EGF含量数值从高到低依次为:A组、C组、B组。
　　结论:
　　1.三种不同处理的离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）活性因子相同;
　　2.三种不同处理的离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）间bFGF、EGF、BMP-2、OPG、IGF-1五种活性因子的含量没有显著性差异，TGF-β1、VEGF-A、PDGF-BB三种活性因子的含量有显著性差异;
　　3.三种不同处理的离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）性状不同，所含活性因子成分相同，个别活性因子的含量有显著差异，生物学效能近似，可以适用于临床不同需求，拓宽临床应用范围。